微生物培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料，由于微生物具有不同的營養類型，對營養物質的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培養基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養角度分析，微生物培養基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。

       培養基是微生物實驗必不可少的，需要進行培養基配制和滅菌，那么微生物培養基該如何配制、培養基滅菌是否徹底，滅菌后如何儲存？今天小編和大家聊聊這個問題吧！

       培養基的制備

       1、配制溶液

       按照干粉培養基的配方，稱取合適的量，加入蒸餾水使其溶解，最后向容器內加入剩余的水量。

       將上述已配好的培養基加熱至完全融化，并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。

       2、調節pH值

       用pH試紙(或pH計、氫離子濃度比色計)測試培養基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節，直到調節到配方要求的pH值為止。

       3、過濾

       用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾.用紗布過濾時，最好折疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾。

       4、分裝

       已過濾的培養基應進行分裝.如果要制作斜面培養基，須將培養基分裝于試管中。如果要制作平板培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝于錐形瓶內。分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養基。分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。裝入試管的培養基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定.一般制作斜面培養基時，每只15×150毫米的試管，約裝3～4毫升(1/4～1/3試管高度)，如制作深層培養基，每只20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每只錐形瓶裝入的培養基，一般以其容積的一半為宜。

       5、加塞

       分裝完畢后，需要用合適的塞子堵住管口或瓶口，塞好塞子的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩或者皮筋捆札，準備滅菌。

       6、制作斜面培養基和平板培養基

       培養基滅菌后，如制作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。

(1)制作斜面培養基。在實驗臺上放1支長0.5～1米左右的木條，厚度為1厘米左右，將試管頭部枕在木條上，使管內培養基自然傾斜，凝固后即成斜面培養基。

(2)制作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗臺上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養皿蓋，右手迅速將培養基倒入培養皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度.鋪放培養基后放置15分鐘左右，待培養基凝固后，再5個培養皿一疊，倒置過來，平放在恒溫箱里，24小時后檢查，如培養基末長雜菌，即可用來培養微生物。

       培養基滅菌效果的影響因素有哪些

       1、營養成分的保持

       濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養基的營養成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當數量被破壞。在熱的作用下某些營養成分還可能因受熱而相互之間發生反應，造成培養基中原有營養成分的數量變化，因而影響培養基質量。

       2、微生物的耐熱性

       細菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細菌芽孢減少到所規定數目的時間。

       3、pH值

       pH值對微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時，微生物最不易死亡。pH<6.0時，微生物比較容易死亡，此時H+很容易滲入微生物的細胞，從而改變細胞的生理反應，促使其死亡。所以培養基的pH越低，所需的時間也越短。

       4、培養基成分

       油脂、糖類及蛋白質等組成的高濃度有機物會包于細胞的周圍形式一層薄膜、影響熱的傳導。而高濃度的鹽類、色素則削弱其耐熱性，滅菌較易。例如：大腸桿菌在水中加熱至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加熱4-6分鐘才死亡，在30%糖液中需30分鐘才死亡。一般糖類含量較多的時候最好選用115℃，30分鐘；一般的培養基可選擇121℃20分鐘。

       5、泡沫

       泡沫中的空氣形成隔熱層，使熱量難以滲透進去，殺死其中的雜菌。

       6、顆粒

       顆粒小，容易滅菌，顆粒大，則難滅菌。對于含有少量較大顆粒及粗纖維的培養基，可用粗濾的方法（不應影響培養基質量）予以除去，培養基結塊會造成培養基滅菌的不徹底。

       8、滅菌鍋內空氣是否排凈

       這個是影響滅菌是溫度和壓力比例關系的要點，同樣達到了相同的壓力的情況下，如果空氣未能排凈，也就是說不是純蒸汽滅菌，此時的溫度不一定能達到目的要求，會嚴重影響滅菌效果。

       滅菌后的培養基存放時間和保存方式

       1、瓊脂培養基的融化

       將培養基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高壓鍋中的層流蒸汽）使之融化。經過高壓的培養基應盡量減少重新加熱時間，融化后避免過度加熱。融化后應短暫置于室溫中（如2min）以避免玻璃瓶破碎。

       融化后的培養基放入47℃～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據實際培養基凝固溫度適當提高水浴鍋溫度)，直至使用，培養基達到47℃～50℃的時間與培養基的品種、體積、數量有關。融化后的培養基應盡快使用，放置時間一般不應超過4h。未用完的培養基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養基尤應注意，融化后保溫時間應盡量縮短，如有特定要求可參考指定的標準。

       傾注到樣品中的培養基溫度應控制在約45℃左右。

       2、平板的制備和儲存

       傾注融化的培養基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3mm（直徑90mm的平皿，通常要加入18mL～20 mL瓊脂培養基）。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存，或者培養時間超過48h或培養溫度高于40℃，則需要傾注更多的培養基。凝固后的培養基應立即使用或存放于暗處和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中，以防止培養基成分的改變。在平板底部或側邊做好標記，標記的內容包括名稱、制備日期和（或）有效期。也可使用適宜的培養基編碼系統進行標記。

       將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產生，平板應冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養基表面進行干燥處理。

       對于采用表面接種形式培養的固體培養基，應先對瓊脂表面進行干燥：揭開平皿蓋，將平板倒扣于烘箱或培養箱中（溫度設為25℃～50℃）；或放在有對流的無菌凈化臺中，直到培養基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。